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| 產(chǎn)地 | 日本 |
| 保存條件 | |
| 品牌 | TAKARA |
| 貨號 | T100B |
| 用途 | NK細(xì)胞培養(yǎng) |
| 組織來源 | |
| 細(xì)胞形態(tài) | NK細(xì)胞 |
| 是否是腫瘤細(xì)胞 | 否 |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | |
| 器官來源 | |
| 免疫類型 | |
| 品系 | |
| 生長狀態(tài) | 正常 |
| 物種來源 | |
| 包裝規(guī)格 | 2.5mg |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
產(chǎn)品英文名：TAKARA RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)，F(xiàn)N CH-296
產(chǎn)品中文名：TAKARA RetroNectin®重組人纖維蛋白片段，F(xiàn)N CH-296
RetroNectin®是在大腸桿菌中產(chǎn)生的重組人纖維蛋白片段FN CH-296。 當(dāng)包被在培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板表面時(shí)，RetroNectin®能顯著增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。
RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和激發(fā)型CD3單抗可分別與T淋巴細(xì)胞上的VLA和TCR結(jié)合，兩者共同作用激活酪氨酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細(xì)胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。
組份
RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 0.5 mg (Cat. #T100A)
RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 2.5 mg (Cat. #T100B)
RetroNectin is provided as a sterile 1 mg/ml solution.
[Form] Sterile solution containing 12.5 mM sodium citrate (pH 6.2) and 1.25% sucrose
儲存
-20℃
Caution: Freezing and thawing can be repeated up to 10 times
RetroNectin原理
RetroNectin是重組人纖維蛋白片段FN CH-296，包括細(xì)胞結(jié)合域，肝磷脂結(jié)合域和CS1位點(diǎn)三個(gè)功能區(qū)域。它由574個(gè)氨基酸組成，分子量63 kDa。RetroNectin能夠大幅地提高逆轉(zhuǎn)錄病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的感染效率，其作用原理是：細(xì)胞表面VLA-4及VLA-5可分別與RetroNectin上的CS-1位點(diǎn)及細(xì)胞結(jié)合域結(jié)合，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以與肝磷脂結(jié)合域結(jié)合。在經(jīng)RetroNectin包被的培養(yǎng)容器表面，細(xì)胞與病毒載體以高濃度共存，從而提高基因轉(zhuǎn)染效率。RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和激發(fā)型CD3單抗可分別與T淋巴細(xì)胞上的VLA和TCR結(jié)合，兩者共同作用激活酪氨酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細(xì)胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。
RetroNectin逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)操作流程
RetroNectin技術(shù)可以顯著提高逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)染效率，這一發(fā)現(xiàn)克服了向造血干細(xì)胞中導(dǎo)入基因的困難。現(xiàn)在，RetroNectin技術(shù)已成為使用逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作的常規(guī)選擇，其操作流程大致如下：
1. 注射用水或滅菌蒸餾水充分溶解RetroNectin，調(diào)節(jié)濃度至1mg/ml。
2. 0.22 μm濾膜過濾RetroNectin溶液，分裝后-20 ℃保存。
3. 用緩沖液將RetroNectin溶液稀釋至20～100 μg/ml。
4. 將RetroNectin稀釋液加入24孔板，每孔0.5 ml (建議用PBS緩沖液稀釋RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。
5. 室溫放置4小時(shí)或4 ℃，避光，過夜。
6. 吸出RetroNectin溶液，每孔加入PBS終止液0.5 ml。
7. 室溫放置30分鐘。
8. 加入適量PBS清洗孔板。
9. 吸出清洗液，得到RetroNectin包被的孔板 (如果暫不使用，可以在孔中加入適量PBS，用膠膜將平板蓋密封，避免RetroNectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前將PBS吸出) 。
10. 逆轉(zhuǎn)錄病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
11. 將病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。
12. 32 ℃放置4小時(shí)。
13. 吸出病毒保存液。
14. 每孔加入待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞懸液400 μl (通常細(xì)胞濃度為1 × 105/ml) 。
RetroNectin增強(qiáng)T細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)流程
T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.
1. RetroNectin和CD3單克隆抗體包被培養(yǎng)袋。
2. 同時(shí)，來自PBMC的T細(xì)胞用GT-T551培養(yǎng)基+IL-2+血漿培養(yǎng)。
3. 第4天，T細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)袋，繼續(xù)用GT-T551培養(yǎng)基+IL-2+血漿培養(yǎng)。
4. 第7天，添加更多GT-T551培養(yǎng)基+IL-2。
5. 0天，分裝兩個(gè)培養(yǎng)袋，添加更多GT-T551培養(yǎng)基+IL-2。
