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| 產(chǎn)地 | 美國(guó) |
| 保存條件 | |
| 品牌 | BD |
| 貨號(hào) | 565082 |
| 用途 | 細(xì)胞內(nèi)染色（流式細(xì)胞術(shù)）（常規(guī)測(cè)試） |
| 組織來(lái)源 | |
| 細(xì)胞形態(tài) | |
| 是否是腫瘤細(xì)胞 | |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | |
| 器官來(lái)源 | |
| 免疫類型 | |
| 品系 | |
| 生長(zhǎng)狀態(tài) | |
| 物種來(lái)源 | |
| 包裝規(guī)格 | 1mg/支 |
| 純度 | 99% |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
CFSE染料
提供的材料
CFSE染料（2瓶，每瓶500μg染料）
需要但未提供的材料
? 目標(biāo)原代淋巴細(xì)胞的活單細(xì)胞懸浮液
? 新鮮細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)二甲基亞砜（DMSO;如Sigma D2650）
? 無(wú)菌杜爾貝科磷酸鹽緩沖鹽水（1× DPBS）
? 細(xì)胞培養(yǎng)基，如10%胎牛血清（FBS）
? 無(wú)菌聚丙烯 15 mL 或 50 mL 錐形管
? 微量離心管或2-mL冷凍管
? 用于免疫表型或功能分析的熒光抗體（可選）
所需設(shè)備
? 配備藍(lán)色激光的細(xì)胞儀;例如，BD FACSCanto™ II、BD LSRFortessa™、BD LSR™ II 流式細(xì)胞儀或 BD Accuri™ C6
? 離心機(jī)
? 37°C CO2 培養(yǎng)箱和 37oC 水浴
存儲(chǔ)
到達(dá)后，用干燥劑儲(chǔ)存染料粉末，并在≤-20°C下避光，直到使用。用DMSO重構(gòu)后，將帶有干燥劑的儲(chǔ)備溶液儲(chǔ)存在≤-20°C的小等分試樣中。如果按照指示儲(chǔ)存，儲(chǔ)備溶液穩(wěn)定3個(gè)月。
程序
CFSE的 吸收率為490 nm， 發(fā)射波長(zhǎng)為520 nm。在用該試劑染色前，請(qǐng)確認(rèn)您的流式細(xì)胞儀能夠激發(fā)熒光染料并區(qū)分發(fā)出的熒光。
DMSO中CFSE染料溶液的制備
1. 通過(guò)將90μL DMSO加入一小瓶CFSE來(lái)制備10 mM CFSE染料儲(chǔ)備溶液。通過(guò)渦旋 混合。
2. 使用適當(dāng)標(biāo)記的微量離心管或2-mL冷凍管制備一次性等分試樣CFSE儲(chǔ)備溶液（用戶定義的體積）。
3. 用干燥劑在≤-20°C下冷凍所有等分試樣，避光。
細(xì)胞的 CFSE 標(biāo)記
該程序已針對(duì)標(biāo)記細(xì)胞濃度為10-30×10 ^ 6個(gè)細(xì)胞/ mL的小鼠和人淋巴細(xì)胞進(jìn)行了優(yōu)化。檢測(cè)條件可能需要針對(duì)其他細(xì)胞類型或細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化。
1. 解凍CFSE的10 mM儲(chǔ)備溶液，如果先前冷凍。
2. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15或50 mL聚丙烯離心管中。
3.在1× DPBS中洗滌細(xì)胞，以除去任何殘留的血清蛋白。
4. 重復(fù)步驟 3。
5.將細(xì)胞以10-30×10 ^ 6個(gè)細(xì)胞/ mL的濃度在1× DPBS中將細(xì)胞 重懸到單個(gè)細(xì)胞懸浮液中。
a. 注意：避免在含疊氮化物、血清或蛋白質(zhì)的緩沖液中染色，因?yàn)檫@些部分與游離染料結(jié)合，并可能干擾細(xì)胞的染色。
6. 將原液CFSE加入單細(xì)胞懸浮液中，以達(dá)到1-10μM的最終濃度。如有必要，在加入單細(xì)胞懸浮液之前，可以用DMSO進(jìn)一步稀釋儲(chǔ)備溶液。立即渦旋。
7.將染細(xì)胞懸浮液在37°C水浴中孵育10-15分鐘。
8.離心將9×原體積為1× DPBS的細(xì)胞和沉淀細(xì)胞中加入。
9.傾析上清液并輕輕混合以破壞細(xì)胞沉淀。
10. 加入10 mL含有10%FBS的完全培養(yǎng)基，并重復(fù)離心步驟。
11.傾析上清液并輕輕混合以破壞細(xì)胞沉淀。
12.將細(xì)胞重懸于完整培養(yǎng)基中，然后通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或分析。
筆記：
通過(guò)將標(biāo)記的細(xì)胞與未標(biāo)記的對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行比較來(lái)確認(rèn)細(xì)胞標(biāo)記的亮度。
2. BD Horizon™ CFSE可用于需要用甲醛固定和用甲醇和去垢劑透化等用于BD磷流™染色（例如，類別558050，BD Phosflow™ Perm緩沖液III），細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色（例如，554714號(hào)，BD細(xì)胞固定/全™甲基化試劑盒）或轉(zhuǎn)錄因子染色（例如， 貓。No. 562574/562725， BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set）。
3. 通過(guò)增加初始 CFSE 染料上樣濃度，可實(shí)現(xiàn)更高的初始染色強(qiáng)度。然而，與其他含有痕化染料的琥珀酰亞胺酯一樣，較高的負(fù)載濃度可能導(dǎo)致細(xì)胞毒性增加或細(xì)胞死亡。
