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| 產(chǎn)地 | 美國(guó) |
| 保存條件 | |
| 品牌 | BD |
| 貨號(hào) | 556463 |
| 用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 組織來(lái)源 | |
| 細(xì)胞形態(tài) | |
| 是否是腫瘤細(xì)胞 | |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | |
| 器官來(lái)源 | |
| 免疫類(lèi)型 | |
| 品系 | |
| 生長(zhǎng)狀態(tài) | |
| 物種來(lái)源 | |
| 包裝規(guī)格 | 2mL/支 |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
PI染色液可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測(cè)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Propidium Iodide是一種DNA 結(jié)合性染料，其激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和630nm，產(chǎn)生紅色熒光，但無(wú)膜通透性，不能透過(guò)活細(xì)胞膜，只能染死細(xì)胞。因此，在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞不能著色，早期凋亡細(xì)胞呈微弱紅光，晚期凋亡細(xì)胞紅光加強(qiáng)，壞死細(xì)胞呈強(qiáng)紅色熒光。也可采用流式細(xì)胞儀利用細(xì)胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性改變進(jìn)行分析，還可與RNase A結(jié)合進(jìn)行細(xì)胞周期分析。
儲(chǔ)存條件：4℃避光保存。長(zhǎng)期保存-20℃避光保存。
有效期：六個(gè)月。
注意事項(xiàng)：
●本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或 。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
● Propidium iodide是光敏物質(zhì)，請(qǐng)注意避光。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。
● 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
● 使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并 清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
使用方法：
使用注意事項(xiàng)：
●本染色液用于細(xì)胞染色分析，也可用于石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞涂片的檢測(cè)。石蠟切片用常規(guī)方法脫蠟、分化、冰凍切片用冰丙酮固定后檢測(cè)。以下以培養(yǎng)細(xì)胞的熒光顯微鏡檢測(cè)為例，細(xì)胞染色可用預(yù)冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小時(shí)，也可不固定，其他方法請(qǐng)參閱相關(guān)資料。
● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
●染色后請(qǐng)盡快檢測(cè)。
●染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
● PI有毒，操作時(shí)要戴上手套。
● 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)，其DNA可染性降低被認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一，但這種DNA可染性降低也可能是因?yàn)镈NA含量的降低，或者是因?yàn)镈NA 結(jié)構(gòu)的改變使其與染料結(jié)合的能力發(fā)生改變所致。在分析結(jié)果時(shí)應(yīng)該注意。
熒光顯微鏡觀察
1．收集細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞一次，2000rpm離心5分鐘，用PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度約為106個(gè)/ml；
2．取100μl細(xì)胞懸液，加入2-10μl PI染液，輕輕混勻；
3．4℃避光放置5min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；
4．熒光顯微鏡檢測(cè)。
流式檢測(cè)：
1．收集細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞一次，2000rpm離心5分鐘，用PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度約為106個(gè)/ml；
2．500μl細(xì)胞懸液中加入5μl PI染液；
3．4℃避光放置30min；
4．流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
結(jié)果分析：
置于熒光顯微鏡下用488nm 激發(fā)光觀察結(jié)果：正常細(xì)胞不能著色，早期凋亡細(xì)胞呈微弱紅光，晚期凋亡細(xì)胞紅光加強(qiáng)，壞死細(xì)胞呈強(qiáng)紅色熒光。
流式檢測(cè)用氬離子激發(fā)熒光，激光光波波長(zhǎng)為 488nm，發(fā)射光波波長(zhǎng)大于630nm，產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強(qiáng)度的直方圖也可分析前散射光對(duì)側(cè)散射光的散點(diǎn)圖。在前散射光對(duì)側(cè)散射光的散點(diǎn)圖或地形圖上，凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞相比，前散射光降低，而側(cè)散射光可高可低，與細(xì)胞的類(lèi)型有關(guān)；在分析PI熒光的直方圖時(shí)，先用門(mén)技術(shù)排除成雙或聚集的細(xì)胞以及發(fā)微弱熒光的細(xì)胞碎片，在PI熒光的直方圖上，凋亡細(xì)胞在G1/G0 期前出現(xiàn)一亞二倍體峰。如以G1/G0 期所在位置的熒光強(qiáng)度為1.0，則一個(gè)典型的凋亡細(xì)胞樣本其亞二倍體峰的熒光強(qiáng)度為0.45，可用雞和鮭魚(yú)的紅細(xì)胞的PI熒光強(qiáng)度做參照標(biāo)準(zhǔn)，兩者分別為0.35和0.7，可以確保在兩者之間的不是細(xì)胞碎片而是完整的細(xì)胞。
