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| 產(chǎn)地 | USA |
| 品牌 | Invivogen |
| 貨號(hào) | 11668019 |
| 用途 | 提供高效轉(zhuǎn)染 |
| 包裝規(guī)格 | 1.5ml |
| CAS編號(hào) | |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
脂質(zhì)體2000是專(zhuān)門(mén)用于將核酸轉(zhuǎn)染進(jìn)入真核細(xì)胞的一種形式,
我們提供下列的建議: 在多種細(xì)胞和培養(yǎng)板中都有很高的轉(zhuǎn)染效率。
在網(wǎng)上列出的細(xì)胞類(lèi)型中都獲得了較高的轉(zhuǎn)染效率。
核酸-脂質(zhì)體2000的復(fù)合物可以直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,無(wú)論是有血清還是無(wú)血清的情況。
轉(zhuǎn)染之后不用移除復(fù)合物或者更換培養(yǎng)液,但是復(fù)合物應(yīng)在轉(zhuǎn)染后4-6h移除。
轉(zhuǎn)染的一些重要指導(dǎo) DNA轉(zhuǎn)染使用page3 我們建議使用Opti-MEM I reduced serum 培養(yǎng)基來(lái)稀釋11668019脂質(zhì)體2000和核酸。
轉(zhuǎn)染時(shí)不要向培養(yǎng)基中加入抗生素。 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要保持一樣的條件
DNA轉(zhuǎn)染 使用下列方法在24孔板內(nèi)轉(zhuǎn)染DNA進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。對(duì)于其他的板子,
可以參考page4.所有的數(shù)量和體積都是基于一個(gè)孔的劑量。
準(zhǔn)備復(fù)合物使DNA(ug):脂質(zhì)體(ul)的比例為1:2到1:3。
轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度較高可以獲得高的效率,高的表達(dá)水平,以及使毒性降低。
條件的選擇很重要。 1. 貼壁細(xì)胞:在轉(zhuǎn)染前一天,向24孔板內(nèi)接種0.5-2*105個(gè)細(xì)胞,使得細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)融合 率達(dá)到90-95%。
切記使用不含抗生素的培養(yǎng)基。
2. 對(duì)于每一個(gè)轉(zhuǎn)染樣品,按照如下方法準(zhǔn)備復(fù)合物:
A. 使用無(wú)血清的培養(yǎng)基將DNA稀釋為50ul,溫和混勻。
B. 使用前混勻11668019脂質(zhì)體2000,然后用培養(yǎng)基將一定量的脂質(zhì)體2000稀釋為50ul。室溫 孵育5min。 進(jìn)行到c時(shí)間不超過(guò)25min
C.5min的孵育后,混合稀釋的DNA和稀釋的脂質(zhì)體2000(總體積為100ul)。溫和混勻,室溫孵育20min(溶液呈現(xiàn)云霧狀)。
混合物在室溫可穩(wěn)定存在6h。
3. 向含有細(xì)胞和培養(yǎng)液的板子中每孔加入100ul的復(fù)合物,通過(guò)敲打板子和來(lái)回晃動(dòng)使其 混合均勻。
4. 細(xì)胞孵育18-48h后可檢測(cè)轉(zhuǎn)染情況。培養(yǎng)液可在轉(zhuǎn)染4-6h后更換。
5. 對(duì)穩(wěn)定的細(xì)胞系:傳代細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后以1:10的比例加入新鮮的培養(yǎng)液。
天加入選擇 培養(yǎng)基。 優(yōu)化轉(zhuǎn)染 為了獲得高的轉(zhuǎn)染效率和低毒性,通過(guò)調(diào)整細(xì)胞濃度和DNA11668019脂質(zhì)體2000的比例來(lái)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
確保細(xì)胞90%的融合,以及DNA(ug):脂質(zhì)體(ul)比例在1:0.5到1:5。
轉(zhuǎn)染條件的浮動(dòng) 轉(zhuǎn)染到不同類(lèi)型的培養(yǎng)板中,
脂質(zhì)體2000的,核酸的量,細(xì)胞數(shù)以及合適的培養(yǎng)基量,都在下表中顯示。在96孔板中,建議總體積到50ul
Lipofectamine® 2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多用途轉(zhuǎn)染試劑,可在各種貼壁和懸浮細(xì)胞系中提供高效轉(zhuǎn)染。研究人員可使用Lipofectamine® 2000試劑進(jìn)行基于siRNA和shRNA的基因敲除實(shí)驗(yàn)及基因表達(dá)研究。Lipofectamine® 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的*試劑。
